Modele hdm ec 122

Le locus génétique CDKN2A (INK4A/ARF) sur le chromosome 9p21 est parmi les plus largement inactivés dans le cancer de l`homme (1) et encode deux suppresseurs tumoraux: le suppresseur de cycle cellulaire p16INK4A et P14ARF (2), un régulateur de la stabilité de la pression (3). Les altérations somatiques à ce locus surviennent fréquemment dans les tumeurs solides, et la suppression du gène ARF par la lignée germinale prédispose au syndrome du mélanome-astrocytome (4). L`importance de P14ARF et de son homologue de souris p19Arf dans la suppression tumorale a été confirmée par de nombreuses études expérimentales (2, 3, 5 – 8), et le Knockout spécifique du gène p19Arf entraîne une fréquence accrue de divers types de tumeurs chez la souris (5, 7, 9). On sait que p19Arf se lie et inactive MDM2, un régulateur négatif du suppresseur de tumeur (3). La stabilisation induite par le P14ARF du facteur de transcription de la b. a conduit à l`expression de gènes cibles critiques de l`ADN, qui peuvent médier l`arrêt du cycle cellulaire ou induire l`apoptose (6, 7, 10). Par conséquent, il est largement supposé que P14ARF peut supprimer la croissance de la tumeur par le biais de l`, et que P14ARF perte ou HDM2 amplification sont des moyens alternatifs pour inactiver la même voie de suppresseur de tumeur (11). Citation pour cet article: J Clin Invest. 2012; 122 (4): 1283 – 1295. doi: 10.1172/JCI38596. (A) Blot occidental montrant l`induction de l`expression de protéine TIMP3 par P14ARF dans les cellules a5 et A18. L`induction de la Dox était comme dans la figure figure 1.1.

l`α-tubuline a été utilisé comme un contrôle de chargement. (B) tache nordique montrant que P14ARF induit une expression de l`ARNm TIMP3 de façon dose-dépendante (0,25 à 2 μg/ml d`induction de la DOX pendant 48 heures). Le mRNA GAPDH a été utilisé comme un contrôle de chargement. (C) panneau de gauche: Blot occidental montrant l`effet de l`activation génique endogène P14ARF par le FEM sur l`expression de TIMP3. Les cellules de HFF-1 ont été cultivées en milieu sans sérum pendant 12 heures, puis traitées avec le FEM (100 ng/ml) pendant 24 heures. Les expositions courtes et longues (exp.) sont affichées pour P14ARF. Panneau de droite: l`analyse de densitométrie de l`expression P14ARF et TIMP3 a été réalisée avec le logiciel ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/) (panneau de droite). Les données combinées de 2 expériences indépendantes (n = 2) sont présentées avec le SD. * * P < 0,01, non apparié 2-queue étudiant t test. (D) Blot occidental montrant le silençage de p19Arf réduit l`expression TIMP3 dans les fibroblastes de souris. Les cellules MEFs (passages 3 et 4 [P3 et P4]), (10) 3 et 3T3 ont été transfectées dans des conditions exemptes de sérum avec soit 40 nM siCtrl ou sip19Arf avec Lipofectamine RNAiMax pendant 48 heures. Sérum (3%) a été ajouté au milieu après 20 heures de transfection.

la β-actine a été utilisée comme contrôle de chargement. Ce travail a été appuyé par des subventions de la NIH (CA86335 et CA116804 à E.G. Van Meir, CA138292 pour le Winship Cancer Institute, et AR42687 au centre de recherche sur les maladies d`Emory), la Fondation de tumeur cérébrale pédiatrique et la Fondation de tumeur cérébrale du sud-est (à E.G. Van Meir et A. Zerrouqi), l`Association américaine de tumeur cérébrale (à B. Pyrzynska). Nous remercions Martine Roussel, Charles Sherr, et Gerard Zambetti (St. Jude Children`s Research Hospital) d`avoir fourni des MEFs à élimination directe, Arnold Levine (Institute for Advanced Study, Princeton, New Jersey, États-Unis) pour avoir fourni (10) 3 fibroblastes, Yue Xiong (Université de Caroline du Nord, Chapel Hill, Caroline du Nord, États-Unis) pour le plasmide pTRE-HA-ARF, Stephan Smale (Université de Californie, Berkeley, Californie, États-Unis) pour la construction CMVSp1, Bert Vogelstein (The Johns Hopkins Oncology Center) pour la LRV-MDM2-NEO, et Paula Vertino pour des discussions utiles. Sur la fenêtre suivante, mettez un chèque sur auto supprimer l`appareil après la mise à jour et cliquez sur Next cellules ont été cultivées dans DMEM complété avec 2% de sérum et ont été traités avec Dox (2 μg/ml) pour induire l`expression P14ARF.